Lors du sous clonage de l'ADN dans une région pUC, la production de galactosidase est interrompue et rendant les cellules incapables d'hydrolysées X-Gal. Les colonies produites dans ce cas sont blanches au lieu de bleu. Dans cette expéérience vous clonerez l'ADN à l'aide d'un plasmide linéaire et de ligase T4. Après la ligature permettant la synthèse du plasmide recombinant, les cellules E. coli compétentes sont transformées et vous compterez le le nombre de colonies blanches et bleues résistantes aux antibiotiques. L'activité de la ß-galactosidase sera ensuite dosée à partir de cellules bactériennes bleues et blanches.
Cette expérience peut être décomposée en trois modules : ligature, transformation et dosage de la ß-galactosidase.
Ce kit contient :
- fragment ADN et plasmide pUC linéaire
- ligase T4
- BactoBeads™ pour transformation
- tampon de reconstitution
- X-gal dans solvant
- IPTG
- chlorure de calcium
- antiobiotique
- bouillon LB Agar ReadyPour™
- milieu bouillon LB pour récupération
- milieu de croissance
- composants de l'essai
- fournitures plastiques
- et instructions.
Pour cette expérience, vous aurez besoin :
- incubateur
- agitateur pour incubateur ou bain-marie
- 2 bains-marie
- four micro-onde ou plaque chauffante
- spectrophotomètre
- balance
- centrifugeuse
- microcentrifugeuse
- verrerie de laboratoire et cuve
- micropipettes et cônes
- eau distillé
- glace
Lors du sous clonage de l'ADN dans une région pUC, la production de galactosidase est interrompue et rendant les cellules incapables d'hydrolysées X-Gal. Les colonies produites dans ce cas sont blanches au lieu de bleu. Dans cette expéérience vous clonerez l'ADN à l'aide d'un plasmide linéaire et de ligase T4. Après la ligature permettant la synthèse du plasmide recombinant, les cellules E. coli compétentes sont transformées et vous compterez le le nombre de colonies blanches et bleues résistantes aux antibiotiques. L'activité de la ß-galactosidase sera ensuite dosée à partir de cellules bactériennes bleues et blanches.
Cette expérience peut être décomposée en trois modules : ligature, transformation et dosage de la ß-galactosidase.
Ce kit contient :
- fragment ADN et plasmide pUC linéaire
- ligase T4
- BactoBeads™ pour transformation
- tampon de reconstitution
- X-gal dans solvant
- IPTG
- chlorure de calcium
- antiobiotique
- bouillon LB Agar ReadyPour™
- milieu bouillon LB pour récupération
- milieu de croissance
- composants de l'essai
- fournitures plastiques
- et instructions.
Pour cette expérience, vous aurez besoin :
- incubateur
- agitateur pour incubateur ou bain-marie
- 2 bains-marie
- four micro-onde ou plaque chauffante
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